同立海源AMMS®HEK293無(wú)血清培養(yǎng)基

產(chǎn)品名稱

通用名稱：AMMS®HEK293 無(wú)血清培養(yǎng)基 

英文名稱：AMMS®HEK293Serum-freeMedium 

產(chǎn)品信息貨 號(hào)：AS-11 

規(guī) 格：1000mL 

保存條件：2~8℃, 避光保存 

有 效 期：12個(gè)月 

性 狀：液體 

適用范圍：HEK293 類細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染 

產(chǎn)品描述AMMS®HEK293 無(wú)血清培養(yǎng)基是一款用于 HEK293 類細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染過(guò)程的無(wú)血清、無(wú)蛋白、無(wú)動(dòng)物源的化學(xué)成分限定培養(yǎng)基。產(chǎn)品中含有 HEPES 、碳酸qing鈉、氨基酸、維生素、酚紅、微量 元素、F-68 等有利于 HEK293 類細(xì)胞生長(zhǎng)和表達(dá)的組分。產(chǎn)品在使用前需加入L-谷氨酰an一起使用。 

產(chǎn)品特點(diǎn)：

 1. 無(wú)血清、無(wú)蛋白、無(wú)動(dòng)物源且化學(xué)成分明確； 

2. 轉(zhuǎn)染效率高，適用于HEK293類細(xì)胞懸浮培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染；

 3. 質(zhì)控嚴(yán)格，性能穩(wěn)定。

 使用說(shuō)明 

1. 使用建議：1. 1 常規(guī)換液或傳代時(shí)，從 4℃冰箱取出的培養(yǎng)基可立刻使用，無(wú)需預(yù)熱至室溫或 37℃;1.2 此款培養(yǎng)基中含 2mML-谷氨酰an，可根據(jù)使用場(chǎng)景適當(dāng)補(bǔ)加。建議蛋白表達(dá)和病毒生產(chǎn)時(shí)可 補(bǔ)加 L-谷氨酰an使終濃度達(dá)到 4~6mM；1.3 無(wú)需離心換液，可直接將細(xì)胞懸液依照所需比例兌入培養(yǎng)液中；1.4 建議傳代后的細(xì)胞密度控制在 5~10×105個(gè)/mL。注意：培養(yǎng) HEK293 類細(xì)胞的建議，可根據(jù)具體實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。

2. HEK293 懸浮細(xì)胞復(fù)蘇及培養(yǎng)：

   2. 1 材料準(zhǔn)備：HEK293無(wú)血清培養(yǎng)基、15mL無(wú)菌離心管、無(wú)菌移液管、無(wú)菌槍頭、無(wú)菌搖瓶、L-谷氨酰an等；

   2.2 在超凈臺(tái)內(nèi)取8mLHEK293無(wú)血清培養(yǎng)基加入15mL無(wú)菌離心管中備用；

   2.3 從液氮罐中快速取出待復(fù)蘇HEK293細(xì)胞，放入37℃水浴鍋中慢慢搖晃2分鐘之內(nèi)融化；

   2.4 將凍存管表面酒精消毒后放入超凈臺(tái)，用移液槍將細(xì)胞液轉(zhuǎn)入之前備用的離心管中；

   2.5 150× g 離心5min；

   2.6 棄上清，用手指輕彈離心管底使細(xì)胞分散，加入2mL培養(yǎng)基后用移液槍輕輕吹打使細(xì)胞分散；

   2.7 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至已加入18mLHEK293無(wú)血清培養(yǎng)基的125mL 搖瓶中，可根據(jù)實(shí)際情況適當(dāng)補(bǔ)加 L-谷氨酰an；

   2.8 將搖瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（37℃,5%二氧化碳濃度，搖床120rpm或根據(jù)實(shí)際情況調(diào) 節(jié)）3~4天，確定細(xì)胞密度和細(xì)胞活率。注意：細(xì)胞活力在復(fù)蘇 24 小時(shí)可能會(huì)有輕微降低，但應(yīng)保持在 70%以上；復(fù)蘇 4~7 天達(dá)到 90% 以上。

3. HEK293 懸浮細(xì)胞傳代：

   3. 1 材料準(zhǔn)備:HEK293 無(wú)血清培養(yǎng)基、無(wú)菌離心管、無(wú)菌移液管、無(wú)菌槍頭、無(wú)菌搖瓶、L-谷氨 xian胺等；

   3.2 傳代前準(zhǔn)備：

   3.2. 1 準(zhǔn)備好將要使用的無(wú)菌搖瓶；

   3.2.2 從培養(yǎng)箱中取出細(xì)胞，注意取出前擰緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺(tái)面，再在鏡下觀 察細(xì)胞；

   3.2.3 觀察細(xì)胞是否被污染，正常的細(xì)胞培養(yǎng)基較為澄清， 若觀察到培養(yǎng)基顏色變黃且渾濁則表示細(xì)胞已被污染，應(yīng)及時(shí)處理。其次是觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞懸液較為 均一，無(wú)絮狀或塊狀物體，否則細(xì)胞可能被污染；

   3.2.4 計(jì)數(shù)，若細(xì)胞密度達(dá)到 4~6×106個(gè)/mL時(shí)，應(yīng)進(jìn)行傳代處理。

   3.3 細(xì)胞傳代：

   3.3. 1 無(wú)需離心換液，可直接將細(xì)胞懸液依照所需比例兌入新鮮 HEK293 無(wú)血清培養(yǎng)基中；

   3.3.2 依據(jù)具體應(yīng)用場(chǎng)景可同時(shí)按比例加入適當(dāng)量的 L-谷氨酰an；

   3.3.3 傳代后的細(xì)胞密度應(yīng)控制在 5~10×105個(gè)/mL；

   3.3.4 一般每周（7天）需傳代 2~3 次；

   3.3.5 將搖瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)（37℃,5%二氧化碳濃度，搖床120rpm或根據(jù)實(shí)際情況調(diào)節(jié)）

4.   HEK293 懸浮細(xì)胞凍存：

   4. 1 制備二甲基亞砜（DMSO）細(xì)胞凍存液，現(xiàn)用現(xiàn)配；

   4.2 將細(xì)胞培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（密度約為 4~6×106 個(gè)/mL），計(jì)數(shù)并離心收集細(xì)胞；

   4.3 用細(xì)胞凍存液將離心好的細(xì)胞以 10×106個(gè)/mL的密度重懸；

   4.4 將適當(dāng)量的細(xì)胞懸液分裝到標(biāo)記好名稱和日期等信息的凍存管內(nèi)，擰緊管蓋；

   4.5 將凍存管放置梯度降溫盒中并置于-80℃冰箱中緩慢降溫；

   4.6 次日將凍存管轉(zhuǎn)移至液氮內(nèi)長(zhǎng)期保存。此過(guò)程需盡可能快速完成（建議在2分鐘內(nèi)）。

   注意事項(xiàng)

   1.培養(yǎng) HEK293 類細(xì)胞的建議，可根據(jù)具體實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。

   2.細(xì)胞活力在復(fù)蘇 24 小時(shí)可能會(huì)有輕微降低，但應(yīng)保持在70%以上；復(fù)蘇 4~7 天達(dá)到 90% 以上。

同立海源AMMS®HEK293無(wú)血清培養(yǎng)基