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產(chǎn)品中心細(xì)胞培養(yǎng)消化酶NC0206-1友康｜特異型干細(xì)胞溫和消化酶
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貨號(hào)：NC0206-1 | 規(guī)格：500 mL/瓶
新一代無(wú)動(dòng)物源、化學(xué)成分明確的干細(xì)胞消化液，專為MSC、iPSC等貼壁干細(xì)胞的無(wú)血清培養(yǎng)體系設(shè)計(jì)，采用多組分復(fù)合酶靶向解離機(jī)制，實(shí)現(xiàn)溫和、高效、高活率的細(xì)胞傳代。
| 項(xiàng)目 | 參數(shù) |
|---|---|
| 產(chǎn)品名稱 | 特異型干細(xì)胞溫和消化酶 |
| 品牌 | 友康生物（YOCON） |
| 貨號(hào) | NC0206-1（同系列另有100 mL裝NC0206-2） |
| 規(guī)格 | 500 mL/瓶 |
| 保存溫度 | -20℃，避光保存 |
| 有效期 | 未開(kāi)封12個(gè)月 |
| 適用范圍 | 人源及動(dòng)物源貼壁干細(xì)胞（MSC、iPSC等）的日常傳代、凍存前處理及下游應(yīng)用準(zhǔn)備 |
| 適用場(chǎng)景 | 無(wú)血清培養(yǎng)體系、臨床級(jí)細(xì)胞制備、3D培養(yǎng)體系及對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)志物完整性要求較高的應(yīng)用（如外泌體制備） |
| 法規(guī)狀態(tài) | 無(wú)動(dòng)物源、化學(xué)成分明確，符合GMP級(jí)細(xì)胞制備要求，已獲FDA DMF備案（備案號(hào)：37790） |
| 目錄價(jià) | ￥1028/500 mL（僅供參考） |
傳統(tǒng)胰-酶（Trypsin）屬于非特異性蛋白水解酶，會(huì)無(wú)差別攻擊細(xì)胞間連接蛋白（如E-cadherin）、細(xì)胞-基質(zhì)粘附蛋白（如integrin）以及細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）成分，在拆解細(xì)胞的同時(shí)也會(huì)破壞細(xì)胞膜表面的關(guān)鍵受體和信號(hào)蛋白，導(dǎo)致重新貼壁能力弱、恢復(fù)周期長(zhǎng)，對(duì)干細(xì)胞而言還可能引發(fā)非預(yù)期的應(yīng)激反應(yīng)或分化。
干細(xì)胞溫和消化酶的核心創(chuàng)新在于從“非特異性蛋白水解"轉(zhuǎn)向“靶向細(xì)胞連接解離"，通過(guò)優(yōu)化的多組分復(fù)合酶配方，主要作用于細(xì)胞外基質(zhì)和特定的細(xì)胞間連接蛋白，最大限度保留細(xì)胞膜完整性、表面受體及功能蛋白，顯著降低消化應(yīng)激。
干細(xì)胞溫和消化酶的技術(shù)突破點(diǎn)包括：
選擇性酶切：針對(duì)細(xì)胞連接蛋白特異性更高，減少對(duì)整聯(lián)蛋白等貼壁關(guān)鍵蛋白的破壞
pH與溫度穩(wěn)定性優(yōu)化：在37℃下活性平穩(wěn)，避免因局部溫度不均導(dǎo)致的消化不均
無(wú)動(dòng)物源成分：避免外源病毒、支原體等污染風(fēng)險(xiǎn)
作用溫和持久：細(xì)胞逐漸變圓、間隙擴(kuò)大，而非瞬間脫落，給予操作者充分的觀察與控制時(shí)間
| 賣點(diǎn) | 優(yōu)勢(shì)說(shuō)明 |
|---|---|
| ?? 定向精準(zhǔn)消化，保護(hù)細(xì)胞功能 | 采用多組分復(fù)合酶體系，靶向作用于細(xì)胞外基質(zhì)和細(xì)胞間連接蛋白，精準(zhǔn)解離細(xì)胞，最大限度保留胞膜功能蛋白完整性。消化后細(xì)胞活率≥90%，24h細(xì)胞貼壁率更快，擴(kuò)增能力優(yōu)于傳統(tǒng)酶類 |
| ? 高容錯(cuò)性，操作友好 | 常規(guī)消化2-5分鐘，極限消化時(shí)間長(zhǎng)達(dá)15-30分鐘仍保持高活率（持續(xù)消化30min細(xì)胞擴(kuò)增倍數(shù)仍可達(dá)9倍，活率維持在90%以上）。對(duì)操作人員的技能要求更低，特別適合大規(guī)模生產(chǎn)場(chǎng)景 |
| ?? 無(wú)需終止，簡(jiǎn)化步驟 | 消化后不需添加胰-酶抑制劑，僅需用新鮮完-全培養(yǎng)基或細(xì)胞培養(yǎng)上清稀釋即可，極大降低使用成本，節(jié)省操作步驟 |
| ?? 無(wú)人源無(wú)動(dòng)物源，合規(guī)性高 | 人工重組體系，無(wú)人源無(wú)動(dòng)物源，所有組分明確，成分完-全限定。內(nèi)毒素＜0.25 EU/mL，已獲美國(guó)FDA DMF備案（備案號(hào)：37790），可支持中美聯(lián)合細(xì)胞藥物申報(bào) |
| ?? 保存更便捷 | 產(chǎn)品為即用型液體，可直接使用，無(wú)需配制。【??L?】 |
| ?? 適配性強(qiáng) | 適用于無(wú)血清培養(yǎng)基體系，完-美適配NC0106、NC0107等系列培養(yǎng)基。消化后僅需用PBS直接稀釋離心去除即可，無(wú)需終止 |
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 說(shuō)明 |
|---|---|
| ?? 間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）傳代 | 專為人源及動(dòng)物源間充質(zhì)干細(xì)胞（臍帶、骨髓、脂肪來(lái)源）的日常傳代和消化，細(xì)胞活率更高，表型正常，后續(xù)傳代不受影響 |
| ?? iPSC/ESC維持培養(yǎng) | 適用于誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPSC）和胚胎干細(xì)胞（ESC）的溫和消化傳代，最大限度保護(hù)多能性，降低非預(yù)期分化風(fēng)險(xiǎn) |
| ?? 臨床級(jí)細(xì)胞制備 | 無(wú)動(dòng)物源成分，GMP體系適配，滿足干細(xì)胞藥物申報(bào)的嚴(yán)苛要求，已獲FDA DMF備案可支持中美聯(lián)合申報(bào) |
| ?? 外泌體制備 | 對(duì)細(xì)胞表面標(biāo)志物完整性要求較高的應(yīng)用場(chǎng)景（如外泌體收獲），避免消化過(guò)程中表面蛋白受損，保障外泌體質(zhì)量 |
| ?? 大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn) | 極限消化時(shí)間長(zhǎng)，容錯(cuò)性高，解決了傳統(tǒng)胰-酶在大規(guī)模培養(yǎng)中消化過(guò)度、難以控制的工藝難題，降低細(xì)胞培養(yǎng)失敗率 |
| ?? 3D細(xì)胞培養(yǎng) | 適用于微載體、水凝膠等3D培養(yǎng)體系中干細(xì)胞的溫和解離，維持細(xì)胞活性與功能 |
| ?? 通用貼壁細(xì)胞傳代 | 除干細(xì)胞外，亦可應(yīng)用于需溫和處理的各類貼壁細(xì)胞系的常規(guī)傳代消化 |
| 對(duì)比指標(biāo) | 傳統(tǒng)胰-酶 | 特異型干細(xì)胞溫和消化酶（NC0206-1） |
|---|---|---|
| 消化機(jī)制 | 非特異性蛋白水解，無(wú)差別攻擊細(xì)胞膜蛋白 | 靶向細(xì)胞連接解離，精準(zhǔn)切割，保護(hù)膜蛋白 |
| 正常消化活率 | 約83% | 95%以上 |
| 超時(shí)消化活率 | 約60% | 95%以上 |
| 極限消化15min活率 | 0～10% | 90%以上 |
| 極限消化30min活率 | 無(wú)法收獲細(xì)胞 | 活率＞90%，細(xì)胞數(shù)仍可達(dá)9倍 |
| 消化后是否需要終止 | 是（需血清或抑制劑） | 否（培養(yǎng)上清稀釋即可） |
| 保存溫度 | -20℃，需冷凍 | 2-8℃，即取即用 |
| 動(dòng)物源成分 | 含豬/牛源成分 | 無(wú)動(dòng)物源，化學(xué)成分完-全限定 |
| 動(dòng)物病毒檢測(cè) | 高成本（需檢測(cè)豬口蹄疫、牛瘋牛病等） | 零-成-本（無(wú)動(dòng)物源成分） |
| 藥物申報(bào)難度 | 雜質(zhì)組分不明，難以證明殘留影響 | 成分明確，均為人工合成組分，申報(bào)難度小 |
| FDA DMF備案 | 不支持 | 已獲FDA DMF備案（37790） |
| 最佳適配體系 | 含血清體系 | 無(wú)血清培養(yǎng)體系 |
| 配套產(chǎn)品 | 品牌/貨號(hào) | 用途 | 推薦理由 |
|---|---|---|---|
| 間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基 | 友康 / NC0106+NC0106.S | MSC擴(kuò)增與傳代 | 完-美適配，無(wú)血清體系下可配套使用，消化后無(wú)需終止，PBS稀釋離心即可 |
| GMP級(jí)玻璃化細(xì)胞凍存液 | 友康 / NC1011 | 干細(xì)胞長(zhǎng)期保存 | 無(wú)蛋白、無(wú)DMSO、無(wú)動(dòng)物源，成分明確，無(wú)需程序降溫，與消化酶體系配套使用 |
| DPBS（無(wú)鈣鎂） | 友康 / BS0301 | 細(xì)胞清洗 | 傳代前清洗細(xì)胞，去除殘留血清蛋白和鈣鎂離子，為消化創(chuàng)造最佳條件 |
| 臍帶MSC原代分離套裝 | 友康 / NC0103+NC0103.S | MSC原代分離 | 從組織塊中原代分離MSC，與消化酶配合使用 |
| GMP級(jí)細(xì)胞凍存液 | 友康 / NC1010 | 細(xì)胞凍存 | 配合消化酶用于細(xì)胞收獲后的GMP級(jí)別凍存 |
以T25培養(yǎng)瓶為例，細(xì)胞融合度達(dá)80-90%時(shí)進(jìn)行傳代：
清洗：吸去舊培養(yǎng)基，加入5 mL無(wú)鈣鎂的DPBS（如友康BS0301），輕輕晃動(dòng)后吸去。若原用含血清培養(yǎng)基，需清洗3次；若為無(wú)血清培養(yǎng)基，清洗1次即可。
消化：加入1 mL特異型干細(xì)胞溫和消化酶，在室溫下消化。
觀察：約2-5分鐘，在顯微鏡下觀察到細(xì)胞變圓、間隙擴(kuò)大，輕拍瓶壁細(xì)胞呈流沙狀脫落。
終止：立即加入2 mL新鮮完-全培養(yǎng)基或細(xì)胞培養(yǎng)上清進(jìn)行稀釋。（無(wú)需額外添加胰-酶抑制劑）
收集：將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至離心管，300g（約1300rpm）離心5分鐘。
重懸：吸去上清，用新鮮培養(yǎng)基（細(xì)胞傳代）或細(xì)胞凍存液（細(xì)胞凍存）重懸細(xì)胞，按所需比例接種。
| 貨號(hào) | 規(guī)格 | 保存溫度 | 目錄價(jià) | 適用場(chǎng)景 |
|---|---|---|---|---|
| NC0206-1 | 500 mL/瓶 | -20℃，避光 | ￥1028 | 大批量、GMP級(jí)細(xì)胞生產(chǎn)、日常傳代 |
| NC0206-2 | 100 mL/瓶 | -20℃，避光 | ￥262 | 常規(guī)科研使用、小規(guī)模驗(yàn)證 |
本品經(jīng)友康生物嚴(yán)格按照GMP標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)，主要質(zhì)控指標(biāo)如下：
| 質(zhì)控項(xiàng)目 | 標(biāo)準(zhǔn) |
|---|---|
| 外觀 | 無(wú)色透明液體 |
| pH（25℃） | 7.0-7.4 |
| 滲透壓 | 270-350 mOsm/Kg |
| 內(nèi)毒素 | ＜0.25 EU/mL |
| 無(wú)菌檢測(cè) | 符合《中國(guó)藥典》無(wú)菌檢測(cè)要求 |
| 支原體檢測(cè) | 陰性 |
| 細(xì)胞毒性 | 符合USP生物相容性標(biāo)準(zhǔn) |
| 穩(wěn)定性 | 有效期后1個(gè)月內(nèi)仍保持各項(xiàng)性狀穩(wěn)定性 |
1. 儲(chǔ)存要求：請(qǐng)嚴(yán)格于 -20℃ 避光保存，可保持產(chǎn)品穩(wěn)定性。
2. 溫度警告：請(qǐng)勿將產(chǎn)品置于2-8℃長(zhǎng)期保存，否則可能導(dǎo)致蛋白酶活性下降或失活，影響消化效果。請(qǐng)勿反復(fù)凍融，凍融會(huì)導(dǎo)致蛋白活性下降、消化時(shí)間延長(zhǎng)。
3. 耗材匹配：下表為不同規(guī)格培養(yǎng)瓶的推薦使用量：
| 培養(yǎng)瓶規(guī)格 | 推薦消化酶用量 | 推薦稀釋液體積 |
|---|---|---|
| T25 | 1 mL | 2 mL |
| T75 | 2-3 mL | 4-6 mL |
| T175 | 5-7 mL | 10-14 mL |
| 多層細(xì)胞工廠 | 按底面積比例調(diào)整 | 按底面積比例調(diào)整 |
4. 常見(jiàn)問(wèn)題解答：
為什么使用干細(xì)胞溫和消化酶？ 消化過(guò)度是干細(xì)胞培養(yǎng)失敗的主要原因之一。在大規(guī)模生產(chǎn)中，消化過(guò)度尤其難以控制。溫和消化酶極限消化時(shí)間長(zhǎng)達(dá)15-30分鐘，活率仍保持90%以上，顯著降低操作風(fēng)險(xiǎn)。
離心后可以不洗直接傳代嗎？ 不可以。殘留的消化酶會(huì)影響后續(xù)干細(xì)胞的貼壁和形態(tài)。
用含血清和無(wú)血清培養(yǎng)基培養(yǎng)的細(xì)胞，使用上有什么區(qū)別？ 相同之處在于消化前都需用無(wú)鈣鎂緩沖液沖洗細(xì)胞。不同之處在于：若使用無(wú)血清培養(yǎng)基，清洗1次即可；若使用血清培養(yǎng)基，必須連續(xù)清洗3次，確保無(wú)血清殘留，否則消化時(shí)間會(huì)變長(zhǎng)。
廣州億寧生物技術(shù)有限公司——專注于高品質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)試劑耗材供應(yīng)
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